收到T25活细胞时,如何操作?
◉ 寄送过程中,为避免细胞脱落死亡,T25瓶为灌液状态出库寄送。收到细胞请检查培养瓶外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题,不要打开盖子,请立即联系我们。
◉ 将原封的T25 瓶用酒精擦拭后转移置37 °C, 5%CO2培养箱中,使细胞回温至37 °C,并让运送过程中少数脱落的细胞再附着生长。稳定2-4小时后,于生物安全柜/超净台内操作:吸出全部灌液培养基,更换新鲜的完全培养基换液处理,或细胞已长满,则将细胞做1:2传代培养。
收到细胞冻存株时,如何操作?
◉ 收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻、漏液等情况,若有请立即联系我们。
◉ 细胞株请尽快复苏培养,或及时转移至液氮中保存。
接收常见问题
刚接收细胞大量漂浮成团怎么办?
一些本身贴壁比较松散的细胞比如293T细胞,收到活细胞时有可能大部分细胞脱离培养瓶壁漂浮起来,显微镜下找不到细胞,只能看到肉眼可见的细胞团,是正常现象。
处理方法
参照以下方式处理即可恢复正常:
收到细胞后请先置于培养箱中稳定2~4h后再进行下一步处理,不建议放置培养箱过夜后处理;
将培养瓶内所有培养基转入50mL离心管,1000rpm离心5min收集漂浮的细胞;
去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶(含EDTA,无钙镁离子)重悬细胞轻轻吹散至没有大细胞团,放入培养箱消化1min左右;
贴壁部分的细胞采用常规的消化流程即可;
消化1min(悬浮)/2-3min(贴壁)后,加入2mL完全培养基混匀终止消化,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散成单细胞,将所有细胞收集到一起1000rpm离心5min;
去掉上清,加入完全培养基混匀,视细胞量决定是1:2传代还是1:3传代(由于细胞运输有损伤,首次传代建议比平时养密度稍高);
显微镜下观察细胞是否有分散成单细胞现象,若有明显很大的细胞团需要重复上述步骤二次消化;
第二天及时观察细胞贴壁情况,若贴壁细胞量过多,造成细胞堆积,贴壁24h后再次传代分瓶,若密度正常则继续生长,不建议换液,贴壁48h后再换液去掉不能贴壁的细胞。
收货处理后,细胞不贴壁
很多细胞在接收传代后可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况,例如RAW 264.7细胞会经常出现这种情况,不用担心,处理一下即可恢复。
处理方法
参照以下方式处理即可恢复正常:
把细胞收集离心,用1mL完全培养基重悬,慢慢地,轻轻地吹打,直到细胞被吹成单细胞,重新铺板。
RAW 264.7脱落后倾向于抱团,抱团时细胞是活着的,但很难贴壁。
一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞,不然细胞很难重新贴壁。
收货处理后,小部分细胞漂浮怎么办?
受运输影响一些细胞可能会漂浮,放入培养箱稳定后可重新贴壁,若稳定后还有极少量细胞不贴壁可直接换液丢弃。