是指在细胞培养过程中,部分细胞贴壁生长,部分细胞悬浮生长,称为贴壁悬浮混合型细胞。
LLC(小鼠Lewis肺癌细胞)、BV2(小鼠小胶质细胞)、PC3(人前列腺癌细胞)、NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)、SP2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤细胞)、COLO 205(人结肠癌细胞)等。
圆形细胞为悬浮细胞,不规则型细胞为贴壁细胞。
大部分圆形悬浮细胞,少量圆形贴壁细胞。
细胞培养
补液/换液
补液:细胞量较少时直接补加1-2mL新鲜的完全培养基即可。
换液:细胞量较多但不够传代时,2-3天离心换液一次。
用移液枪吸出培养液(含悬浮的细胞)转移到无菌离心管中;
贴壁部分:用1mL PBS洗细胞,吸出PBS放入到第1步装有培养液的离心管中收集(不要直接丢弃,里面有细胞);
加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液,倾斜晃匀,吸去大部分胰酶,覆盖所有细胞后置于37℃培养箱静置消化,具体消化时间参考说明书结合细胞生长情况而定。
显微镜下观察细胞消化情况,细胞皱缩变圆后,倾斜培养瓶,细胞呈流沙状完全脱落,即可判断细胞消化完成。
用2mL完全培养基终止消化,沿瓶壁将细胞轻柔吹落,均匀吹散。将消化下来的细胞悬液吹散细胞后收集到第1步的离心管;
将离心管在1000rpm 5min离心,离心完毕弃掉上清,加入新鲜的完全培养基重悬,按实际情况分瓶,放入培养箱培养。
注意事项
在操作过程中,每丢弃一个液体前都要想一下里面有没有可能有细胞,避免丢失细胞。
细胞种类、细胞密度、细胞状态、甚至胰酶的品牌,均影响到细胞的消化时间,所以消化的时候不要只看时间,以显微镜下细胞的状态来确定消化终点,部分难消化的细胞消化时间甚至可以长达15分钟。
细胞的传代比例通常说的是等体积的容器,不同容器需要换算;例如:一个T25培养瓶的细胞传到一个10cm培养皿里面,虽然是1传1,但是比例可不是1:1;T25瓶底面积25cm²,10cm培养皿底面积约为55cm²(10cm的培养皿指的是培养皿的外径,而培养皿的内径约为8.4cm,故根据内径可求出其底面积为55cm²),所以实际传代比例为1:2.2。