以HCEC-B4G12
人角膜内皮细胞为例
图1/2：DSMZ中HCEC-B4G12的细胞形态
培养条件
Human-Endothelial-SFM，10ng/mL FGF-2b（bFGF）
传代方法
1:3传代；消化2-3分钟
倍增时间
40-50 hours（DSMZ）
冻存液配方
完全培养基+10%DMSO
培养难点
部分细胞存在空泡，属于细胞正常特性
使用配套无血清培养基Human-Endothelial-SFM培养，注意效期。
消化条件：无钙、镁离子的PBS清洗细胞后，使用0.25%胰酶+EDTA消化，具体方法为加500uL-1mL胰酶，胰酶润洗细胞表面3-4次后，吸走胰酶，放入37度培养箱消化2分钟。（具体消化时间请在拿到细胞前2次传代时，及时观察，以实际情况为主）
终止消化时，用1mL胰蛋白酶抑制剂（1mg/mL）终止，离心去上清，然后用3mL PBS再次清洗细胞，离心收集后，用新的培养基重悬后铺板。（消化过程中，不要拍瓶身，振荡可促使细胞聚团。）
培养器皿提前使用包被液（10 µg/mL Fibronectin，10 mg/mL 硫酸软骨素）处理，促进细胞贴壁。包被时间至少4小时，建议过夜，室温或37度培养箱包被。可提前包被几个瓶子备用，包被后限一个月内使用。（包被液使用方法：加2-3mL到T25培养瓶或3-4mL到10cm培养皿，放培养箱中，拧上盖子，自然风干。使用时，未风干的包被液枪头吸走即可，然后加1-2mL PBS清洗表面，吸走PBS后即可接种细胞。）
Valtink, M., Gruschwitz, R., Funk, R. H., & Engelmann, K. (2008). Two clonal cell lines of immortalized human corneal endothelial cells show either differentiated or precursor cell characteristics. Cells, tissues, organs, 187(4), 286–294.
https://doi.org/10.1159/000113406
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