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细胞学堂 |如何培养人正常支气管上皮细胞BEAS-2B
发布日期:2023.03.24

 

 
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图1:ATCC中BEAS-2B的细胞形态

 

 
 
 

BEAS-2B细胞从一位非癌个体的正常人支气管上皮病理切片分离,经过腺病毒12-SV40杂交病毒感染并筛选克隆建成永生化细胞系。BEAS-2B细胞保留了对血清反应进行鳞状分化的能力,并用于筛选诱导或影响分化及致癌的化学或生物制剂。PS:细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性。

 
 

 

本文为大家介绍BEAS-2B的

培养条件及注意事项

图2:BEAS-2B的细胞形态

 

 

 
 
培养条件

 

 

 
★ 生长特性:贴壁

  形态特征:上皮细胞样

 培养条件:BEGM培养基 

 传代比例:1:4传代(培养面积比),推荐初始密度为1500-3000细胞/CM2,在细胞完全汇合前传代,防止细胞鳞状分化。传代时应严格控制密度,最少不能低于60%,最高不超过80%。

  传代方式:胰酶(0.25%Typsin+0.53 mM EDTA +0.5%POLYVINYLPYR-ROLIDONE (PVP))消化2分钟

  换液频率:2~3天换液1次
 冻存液配方:89%BEGM +10% DMSO+1% PVP

 

 

 
 
注意事项

 

 

 1

使用无血清培养基BEGM培养,效期2个月。

 2
 
消化条件:无钙、镁离子的PBS清洗细胞后,加1mL胰酶,胰酶润洗细胞表面3-4次后,吸走胰酶,放入37℃培养箱消化2分钟左右。(具体消化时间请在拿到细胞前2次传代时,及时观察,以实际情况为主。)

 

 

 

 

3

终止消化时,用1mL胰蛋白酶抑制剂(2.5mg/ mL)终止,离心去上清,然后用3mL PBS再次清洗细胞,离心收集后,用新的培养基重悬后铺板(消化过程中,不要拍瓶身,振荡可促使细胞聚团。) 

4

注意:80%左右汇合度时传代,完全汇合会使细胞末端分化。

5

刚复苏要使用提前用包被液包被过的培养器皿(包被液配方:0.01mg/mL 黏连蛋白、0.03 mg/mLⅠ型胶原和0.01mg/mL BSA),以增加细胞贴附。培养器皿提前使用包被液处理,包被时间至少4小时,建议过夜。

6
包被液使用方法:加2-3mL到T25培养瓶(3-4mL到10cm培养皿),放无菌环境中,拧上盖子,自然风干。

 

 

 

 

 

 

 

7
复苏后的传代培养过程中可不做包被处理,细胞可正常贴壁。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
血清对细胞的影响
 
 
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用不含血清的培养基培养时,BEAS-2B细胞具有典型的呼吸上皮细胞多边形态;用含血清的培养基培养时,密度低时细胞形态会呈长梭型,但密度高一些以后形态会变短。

 

 

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图3源来自文献

 

    通过比较有/无FBS培养的BEAS-2B的全基因组基因表达情况,发现部分生物途径发生了基因表达变化,主要包括致癌和能量代谢有关的途径。 

 

    实验实时测量BEAS-2B的氧消耗和糖酵解,发现FBS培养的细胞总糖酵解能力增加了1.4倍,基础呼吸增加了1.9倍,产生ATP所消耗的氧气增加了2.0倍;与不使用FBS培养的BEAS-2B相比,最大呼吸量增加了2.8倍。

 

   43%的亚砷酸盐调节基因在mRNA水平上受到胎牛血清的调节。

 

    细胞毒性研究显示,暴露在5%的FBS中8周的BEAS-2B细胞对亚砷酸盐的细胞毒性的敏感性几乎是不接触FBS的BEAS-2B细胞的5倍。

 

    胎牛血清诱导的BEAS-2B的表型变化表明,在使用BEAS-2B作为砷毒性的实验模型时 ,应仔细考虑培养条件。

 

 

[1]Zhao F ,  Klimecki W T . Culture conditions profoundly impact phenotype in BEAS‐2B, a human pulmonary epithelial model[J]. Journal of Applied Toxicology Jat, 2015, 35(8):945-951.  

 DOI:10.1002/jat.3094

[2]Li T, Liu Y, Xu W, et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome[J]. Laboratory Investigation, 2019, 99(6): 819-829. 

DOI:10.1038/s41374-019-0191-3 

(此文献Beas-2B细胞购自赛库生物)

[3]Tan H W, Liang Z, Yao Y, et al. Lasting DNA Damage and Aberrant DNA Repair Gene Expression Profile Are Associated with Post-Chronic Cadmium Exposure in Human Bronchial Epithelial Cells[J]. Cells, 2019, 8(8).  

DOI:10.3390/cells8080842 

(此文献Beas-2B细胞购自赛库生物)

[4]Li X, Jia Y, Nan A, et al. CircRNA104250 and lncRNAuc001.dgp.1 promote the PM2.5-induced inflammatory response by co-targeting miR-3607-5p in BEAS-2B cells[J]. Environmental Pollution, 2020. 

DOI:10.1016/j.envpol.2019.113749

 (此文献Beas-2B细胞购自赛库生物)

[5] Jia Y ,  Li X ,  Nan A , et al. Circular RNA 406961 interacts with ILF2 to regulate PM2.5-induced inflammatory responses in human bronchial epithelial cells via activation of STAT3/JNK pathways[J]. Environment International, 2020, 141:105755.   

DOI:10.1016/j.envint.2020.105755 

(此文献Beas-2B细胞购自赛库生物)

 
 
 

 


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