思想准备：

培养NK92细胞之前必须有充足的思想准备，这株细胞非常不好养，而且不能偷懒，必须勤快。细胞对氧气、密度和养分非常敏感，稍微偷懒拖一天不换液，可能就会导致细胞全部死亡的后果。只要保持换液和传代频率，多注意细胞密度，这株细胞还是可以征服的！
 

细胞形态特点：

细胞偏圆或偏椭圆，透亮，成团生长。只有成团的细胞有增殖活性，单个的细胞基本没有增殖活力（如下图）。细胞团可生长成肉眼可见的大团块。死了的细胞会皱缩，不再透亮而变得灰暗。细胞对氧气、养分及细胞密度非常敏感。养分不够或密度太高情况下，细胞很容易凋亡。

细胞培养技巧：

细胞刚复苏或密度较低时可以把培养瓶立起来培养，以提高细胞密度，促进细胞聚团。当细胞聚团正常生长后，建议平躺着培养该细胞，以增大空气交换面积，且液体高度最好不要超过3mm，一般T25培养瓶加6-8ml培养基，T75培养瓶加15ml左右培养基即可。培养基尽量现配，配好的培养基最好两周内用完，因为叶酸和IL-2不稳定易分解。

一般情况下细胞2-3天换液一次，即使培养基没有变黄。换液时轻轻侧过培养瓶/皿，不要使细胞飘起来，用巴氏吸管轻轻吸取部分上清弃去，补加等体积的新鲜培养基继续培养。或者将全部培养液转移至离心管中，1000rpm离心5min，吸去上清后用新鲜培养轻轻重悬后重新种瓶，重悬时不可吹打过度。细胞对离心和吹打比较敏感，离心和反复吹打会影响细胞状态，建议只在细胞产生大量碎片时才离心清洗。平常换液建议半换，传代可直接补加足够新鲜的培养基后直接分瓶。

细胞团长至肉眼可见，且T25瓶子有几十上百个小团时，细胞数量已经比较多，此时应该2天换液一次。当一个20倍视野有4-5个大细胞团时应该进行传代。传代时加入两倍体积的新鲜培养基后，轻轻吹打细胞团，将大的细胞团打散成小团，但不要剧烈吹打成单细胞悬液，因为单个的细胞是基本没有增殖活力的细胞，然后将混匀的细胞悬液转移至新的培养瓶中。或者将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5min后，弃去上清，加入三倍体积的新鲜培养基轻轻重悬后转移至三个新的培养瓶中。

NK-92冻存液用50%血清+40%完全培养基+10%DMSO, NK92/MI的冻存液则使用90%血清+10%DMSO。细胞数量应在0.5-1.0×106/ml为宜。复苏时可适当加大胎牛血清的含量，以使细胞尽快长起来。复苏后细胞需要重新聚团及较长的潜伏期，故复苏时间较长，期间应多加观察，并注意更换培养基，频率为3天一换（半换）。