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赛库细胞培养及鉴定科普目录合集,一篇解所有!
发布日期:2024.05.10
 

Cell culture 

 

 

不就是养细胞嘛,能有多难!信心来源于知识储备,小编整理罗列了以下科普文章传送门,哪里有疑问点哪里,给您支招和解惑,手把手带您入门,新手胞友常备宝典的不二选择,养细胞不再战战兢兢、小心翼翼!

 

 

 
 

 

 

 

01 细胞营养物及培养器皿选择

 

 

 

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02 细胞接收

 

 

 

 

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▶ 细胞接收说明

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03 细胞培养

 

 

 

 

 

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▶ 细胞培养中容易忽视的几个致命细节

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 细胞培养的常见难题

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 贴壁细胞如何传代

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 悬浮细胞如何传代

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 贴壁悬浮混合型细胞--培养方法及注意事项

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 细胞冻存和复苏的那些事

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04 细胞常见异常情况原因分析及解决方法

 

 

 

 

 

 

▶ 为什么细胞出现空泡?

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▶ 贴壁细胞不贴壁?

①消化过度造成细胞损伤→缩短消化时间或降低胰酶浓度,适度消化

②支原体污染→定期抽样检测,发现污染建议丢弃

③培养基pH值过碱(NaHCO3分解)→用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2

④细胞老化失去贴附性或者复苏细胞本身状态不好已经老化→启用新的保种细胞

⑤接种细胞起始浓度太低或太高、接种细胞数目太少→调整合适的接种浓度,接种数目不要太少,否则无法分泌足够的细胞外基质

 

▶ 细胞生长慢?

①更换培养液或血清→换培养条件前先取部分培养物做测试,测试后再确定是否更换

②培养液中细胞必需生长因子耗尽或成分破坏→补充生长因子或换新配置培养液

③培养物中出现少量污染→用无抗生素培养液培养,发现污染建议丢弃

④试剂保存不当,成分破坏→血清于-10~-20℃保存,培养液于2~8℃避光保存,含血清完全培养液于2-8℃保存且在1周内用完

⑤细胞接种浓度太低→增加起始接种浓度

⑥细胞老化→启用保种细胞

⑦支原体污染→定期检测,发现污染建议丢弃

 

▶ 贴壁细胞生长周期变慢,边养边飘?

①传代时密度太高或太低→建议贴壁细胞汇合度达80%传代,传代密度适中,传代密度过低会延长生长周期

②传代操作不当→根据细胞特性决定细胞消化时间,一般在显微镜下观察细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可终止消化,难消化的细胞可分次消化

③频繁换液或者清洗细胞也会导致细胞状态变差→常规换液时间间隔为2~3天

 

▶ 贴壁细胞传代后部分漂浮?

①传代前细胞密度太大→一般细胞汇合度达到80%时可进行传代操作,传代密度需适中,传代密度过高也会导致传代后漂浮

②细胞状态不好→可通过提高血清比例、稳定培养环境等方法进行改善

③吹打次数过多造成机械损伤→轻柔吹打,细胞呈单颗粒时可停止吹打,吹打过程避免气泡产生

④培养基更换后不适应→更换回原来的培养基或与原培养基比例混合后使用使细胞有个适应期

 

▶ 贴壁细胞传代后全部飘起?

检查所使用的培养基的颜色是否偏紫色、瓶盖是否透气、不透气瓶盖是否被拧松、培养基量是否太少或培养基存放时间太长致培养基变碱→建议配好完全培养基后分装到50mL离心管并于一周内用完,量少时放到15mL离心管里保存。(如果培养箱二氧化碳浓度升高,培养基颜色偏紫,PH升高,培养基会变碱)

 

▶ 贴壁细胞传代后细胞成团?

①细胞本身特性→聚团生长属于正常情况,除非实验需要,否则没必要强行分开

②传代消化时消化时间不够或没吹散→下次传代消化开即可

③血清品质差→尽量使用品质好一点的血清,细胞状态马上就会不一样了,现在血清市场鱼龙混杂,买的时候擦亮眼睛

④细胞状态差→提高血清浓度

 

▶ 传代后细胞变形?

①连续培养的细胞系不同实验室培养的形态会有不一样,就像hela细胞不同实验室培养的形态都不一样,个人操作和血清批次等都会影响细胞形态

②变形,细胞还在生长→可能是血清批次不一样导致,建议使用同一批次血清,更换血清时需与原血清比例混合后使用,使细胞有过渡期

③变形,细胞不长且碎片增多→可能是传代操作过程中损伤,常见于消化不当或支原体等污染致细胞病态,消化时间根据每个细胞的状态来调整,不要消化过度或者消化不充分,培养过程严格无菌操作,确保细胞无外源污染

 

▶ 悬浮细胞贴壁?

①细胞本身特性→正常现象

②静置时间长沉底贴壁→晃一下或者拍一下能起来,贴壁松散的不用做特殊处理

③受刺激致贴壁→用无TC处理培养器皿,避免染菌,用优质血清


▶ 悬浮细胞生长慢或不生长?

①接种密度太低→控制接种传代密度

②细胞状态差→竖瓶培养,提高血清浓度,传代可以看情况选择补液或者半换液方式


▶ 悬浮细胞聚团成簇?

①本身特性→正常现象

②少量聚团,葡萄串状→正常现象,密度较低时易出现,可通过静养(少操作,少观察) 、补加血清(5%)等方式调整

③培养液中含钙、镁离子→用无钙镁离子PBS洗涤细胞,轻轻吹散

④血清品质→使用优质血清

⑤受运输或者天气等环境因素影响→正常培养等待恢复,状态不好可补加血清

 

 

 

 

 

 

05 污染类型及防治

 

 

 

 

 

 

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▶ 细胞污染处理

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▶ 支原体污染和防治

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06 细胞STR鉴定和解读

 

 

 

 

 

 

 

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