赛库细胞接收操作说明

 
非常感谢各位老师及各位同学对我们赛库生物的信任，我司自始至终致力于为客户提供细胞整体解决方案。

收到细胞后先查看细胞说明书，了解细胞类型、培养条件等基本信息，检查细胞培养基是否变色、观察T25培养瓶是否破损、漏液并在显微镜下观察细胞状态，拍照（100x、200X)以做留底。将细胞放入培养箱静置2-4h。
 

贴壁细胞

经物流运输，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶底脱落下来，显微镜下拍照观察可见存在部分悬浮的细胞或细胞团块。

将悬浮的细胞收集离心，使用0.25%胰酶消化后，转移至新的培养瓶中，并使用含15%血清的新鲜完全培养基培养3天;同时对原培养瓶中剩余仍然贴壁的细胞则同样更换含15%血清的新鲜完全培养基，在原瓶中培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞均未增殖且出现状态变差或脱落凋亡现象，烦请提供细胞照片反馈，我们将继续跟进。
 

注:以上说明针对完全培养基所含血清浓度为10%的培养条件，若培养条件为20%血清浓度，则可增加至25%血清浓度，以此类推。其体情况以细胞说明书为准。 

若收到细胞时无特殊情况出现，请在显微镜下观察细胞汇合度后进行处理:

汇合度未超过80%时,使用巴氏吸管或玻璃吸管将培养瓶中的培养基吸出，同时留存6mL左右（需根据说明书记载的培养条件的血清浓度补加血清）继续培养;

汇合度超过80%时，请按照细胞培养条件进行传代培养。初次传代建议按照培养器皿底面积比1:2进行传代。

悬浮细胞

悬浮细胞经过物流运输后有可能产生细胞碎片或发生凋亡，此时请在拍照后将细胞离心收集，使用新鲜的完全培养基(可选择增加血清浓度5%）重悬并转移至新的培养皿/瓶中继续培养3天;3天后若细胞状态未有明显改善，而是停止增殖持续凋亡，烦请提供细胞照片反馈,我们将继续跟进。

若收到细胞时无特殊情况出现，请在显微镜下观察细胞状态后进行处理:

将培养瓶竖立放置1h，待细胞沉降至瓶底，使用巴氏吸管或玻璃吸管将培养瓶中的培养基吸出，同时留存6mL左右（需根据说明书记载的培养条件的血清浓度补加血清），横放培养瓶继续培养;

培养至细胞数量（建议进行细胞计数）达到说明书记载的传代标准后，请按照细胞培养条件进行传代培养。

注:悬浮细胞有最适增长密度，具体请查询细胞说明书或提前咨询。

常见问题Q&A

Q:培养基到底要不要加双抗〔青霉素&链霉素，Penicillin +Streptomycin) ?

A:双抗不是细胞生长所必需的。我司培养细胞时均不常规使用抗生素。同时应考虑到长期使用抗生素后可能会促使抗生素耐药的微生物产生，从而导致轻度污染持续存在。一旦停止加入抗生素，轻度污染极有可能发展成大规模污染。

请根据各自实验室的具体情况，自行决定是否使用双抗。

Q:培养过程中能更换成其它种类的培养基吗?

A:我们强烈建议使用细胞提供机构或国际权威细胞库推荐的培养条件进行培养。不排除部分细胞能够在不同培养条件下正常生长，此时建议在使用推荐培养条件做好保种或细胞维持的情况下，分离部分细胞进行测试后决定是否更改培养条件。

我司同时推出一系列经过测试的细胞完全培养基供您订购。

Q:细胞在培养过程中出现碎片如何处理?

A:贴壁细胞在移除原培养基后，用PBS液润洗2-3遍;悬浮细胞经高心移除原培养基后，加入适量PBS进行重悬，再离心去除PBS;一般建议重复上述步骤2-3遍，800-1000rpm离心3-5分钟。

Q:细胞能放在-80℃保存吗?

A:欲长期保存的细胞应使用液氮(-196℃）进行保存，短时间保存（不超过i-2周)的则可以存放在-80℃。

Q:关于培养条件为无血清培养基的细胞如何培养?

A:培养操作基本同一般细胞，注意进行传代时需使用胰酶抑制剂终止消化，并用无血清培养基重悬细胞，切勿在任何步骤加入血清。