5tgm1培养小tips

IMDM(Gibco cat:12440,或同配方) 10%胎牛血清

• 基础培养基：IMDM(CellCook:CM2011或Gibco cat:C12440500BT,或同配方)

• 血清：南美胎牛血清(CellCook cat:CM1002L)

• 添加剂：\

• 配套完全培养基(CellCook cat:CC9099M)

• 传代比例：维持细胞密度在1*10^5-2*10^6cells/ml

• 传代方式：1:3传代，离心收集(1000rpm,5分钟)

• 换液频率：2~3天换液1次

• 冻存液配方：RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO

• 难度等级：+

• 培养要点：严格控制细胞密度，密度较高时容易产生大量细胞碎片

• 1、这株细胞好养吗？长得快吗？

答：这株细胞培养难度系数不高，比较好养，状态密度正常情况下长得还是比较快的，状态较好1-2天也能达到传代密度。

• 2、细胞状态差是怎么样的？怎样算状态差？

答：细胞变黑，折光度变差，有裂解倾向，死细胞变多，碎片杂质变多，培养液变浑浊，细胞不聚团。例如下图细胞真菌污染后的状态：

 

• 3、细胞密度很低不聚团、生长慢怎么办？

答:①竖瓶培养。竖瓶可以提高细胞密度促进细胞生长，将培养瓶竖置时需注意吹下培养瓶底部的细胞，避免细胞残留，密度起来后恢复水平放置，以保持一定气液比保证细胞呼吸，避免长期竖瓶让细胞出现传质问题；

②提高血清浓度到15%调整细胞状态；

③传代密度不要太低，控制好传代比例。

• 4、这株细胞什么时候可以传代呢？该怎么传代呢？

答：悬浮细胞是否能传代主要通过细胞计数看细胞密度来判断。悬浮细胞常规推荐接种密度为3-5×10⁵cell/mL，生长到2×10⁶cell/mL左右可继续传代。正常情况下可通过离心（800-1000rpm，5min）收集1:3传代。（这株细胞需要注意控制细胞密度，有一定密度依赖，细胞状态不好密度太低可能会不增殖，密度太高时容易产生大量碎片）.

• 5、细胞刚复苏状态不好怎么办？

答：复苏第二天如果细胞状态不行可以补加血清、因子调整，如果细胞状态实在太差死细胞及细胞碎片比较多，细胞生长环境太差可以考虑先离心去除细胞碎片，换新鲜培养基及提高血清浓度培养观察细胞状态（看情况，悬浮细胞复苏三天内一般不建议离心换液）。

很多悬浮细胞刚复苏时活力是相对较差的，此时我们需要给点耐心，等待细胞完成自我修复进入对数增长期。比如THP-1复苏后往往需要7-10天的恢复期，Jurkat，Clone E6-1复苏后也需要5-7天才能恢复状态。很多新手在此期间容易失去信心就直接放弃培养了，还是需要多一点耐心哦！