市面上常见的有经TC处理的细胞培养瓶/皿，可以辅助贴壁细胞贴壁；培养悬浮细胞时应采用无TC处理的细胞培养瓶/皿。

贴壁细胞在正常情况下都会贴壁，但某些细胞本身特性贴壁性差，例如Beas-2B人正常支气管上皮细胞和HCEC-B4G12人角膜内皮细胞，在培养特殊细胞时，需要对培养瓶/皿进行包被，促进细胞黏附，才可以使用。常用的包被液有纤连蛋白、I型胶原等混合物，培养时可根据说明书使用。

✦新手建议使用细胞培养瓶培养，方便操作。

无论什么细胞，汇合度80%~90%左右即需要传代，不可长满。正常细胞（二倍体）存在贴壁接触抑制，长满后细胞生长停止，而肿瘤细胞等非正常细胞，接触抑制作用较弱，可生长至较高的细胞密度，但某些细胞一旦长过，其损伤难以逆转，所以培养细胞时不建议细胞密度太高。

某些特殊的细胞汇合度达到100%会开始分化，例如C2C12小鼠成肌细胞，分化的细胞没有增殖能力，影响后续实验，耽误实验进展，需要严格控制细胞传代密度。

对于一些聚团叠加生长的细胞，需根据实际细胞量判断是否需要传代，并不单纯依据细胞铺满瓶底的汇合度，及时传代，避开细胞损伤，且这类细胞的消化时间一般较久，需要根据具体的细胞量适当调整消化时间。例如HepG2人肝癌细胞、MCF7人乳腺腺癌细胞、Caco-2人结直肠腺癌细胞等。

胰蛋白酶通常使用0.25%，含EDTA，不含钙镁离子。钙镁离子会与EDTA螯合，影响消化效果。所以加胰酶消化前需要用不含钙镁离子的PBS缓冲液润洗2~3次。

细胞消化时间可以参考说明书，但具体的消化时间需要结合细胞量、胰酶浓度等适当调整。调整。

大多数细胞的消化时间在2-3分钟左右，部分贴壁性较差的细胞消化时间较短，部分贴壁牢固且聚团叠加生长的细胞消化时间较长，最长的有30分钟，具体的细胞时间参考说明书，并结合实际细胞量调整。

消化程度判断：显微镜下细胞皱缩变圆，分散成单细胞，倾斜培养瓶可呈流沙状脱落即可终止消化。一些聚团叠加生长的细胞在消化过程中可能不会完全分散成单细胞，皱缩变圆，分解成小细胞团，轻轻吹散再消化1分钟左右即可终止消化。

大部分培养基适合于95%空气 5%CO₂的培养箱。但L15培养基适合于100%空气，无CO₂的培养箱，L15培养基不需要CO₂平衡PH，CO₂会导致培养液PH降低（培养液变黄），严重影响细胞生长；所以使用L15培养基培养细胞，但没有100%空气培养箱时，可以选择密封的细胞培养瓶/皿培养。

对于大部分人源细胞和温血动物细胞系来讲，比较适宜的培养温度是37℃。但有细胞比较特殊，需要用特定的温度培养，比如hFOB1.19 SV40转染人成骨细胞细胞的培养温度为34℃，37℃培养会死亡。