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一、真菌概述
真菌是一类具真核和细胞壁的异养生物。真菌可以通过孢子延续种群,典型的营养体为丝状分支结构。可污染细胞培养基的真菌种类繁多,最常见的有曲霉菌,白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,孢子菌等。
二、真菌污染
真菌污染是细胞培养过程中最常见的另一种污染,尤其在梅雨季节,霉菌污染尤为严重。另外由于真菌可以通过孢子繁殖,因此一旦污染很容易发生扩散。常见的真菌感染有烟曲霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌污染等。
特点
1
真菌污染的细胞培养基短期内一般不会浑浊,可在培养液表面形成白色或黄色漂浮物(斑点状,易于观察);
2
高倍镜下可见明显的丝状、管状或是树枝状的菌丝纵横交错在细胞间;
3
念珠菌和酵母菌污染一般会成卵圆形散在细胞周边,并且酵母菌污染会导致培养液浑浊。
4
真菌污染会与细胞抢夺营养,还会释放次级代谢物毒害细胞,造成细胞活力变差,生长速度变慢,甚至死亡。
酵母污染
镜下可以看到典型的出芽形态
真菌污染防治方法
如果细胞被真菌污染,建议丢弃,重新复苏,以防污染其他细胞。
如果细胞很珍贵,可使用两性霉素B或者300ug/mL的氟康唑处理。
注意
1
发生真菌污染后,将其他细胞移出培养箱,用微量硫酸铜溶液擦拭培养箱,再把水盘里加适量硫酸铜或者磷酸氢二钠高盐液体。
2
细胞培养箱应定期清洁,大约一个月左右清洁一次。
3
最主要的还是要培养良好的无菌观念,实验室尽量不要大声说话,佩戴好口罩,手套,操作时应小心,避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜,这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的繁殖提供了很好的条件。