为什么要进行细胞系鉴定?
据统计,目前有超过30%的细胞系被错误辨识或受到交叉污染。2010年《国际癌症杂志》(IJC)统计出一列表,在346篇文章中,有103篇存在细胞被Hela细胞污染的情况。最可怕的错用是在瑞典某大学的一个研究组里,该研究组从1988年起就错误的使用了Hela,以为是lnt-407细胞系,并因此在从1988到2011年里发表了41篇论文,全部是错的。这些文章发在Oncogen, JBC, Carcinogenesis, PLoS One, J Cell Physiol, Cancer Res, Br J Cancer, Biochem J, Exp Cell Res等众多高质量的杂志上。
近年来,大量研究表明 STR 基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一,STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。美国的ATCC 细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR 分型提供了各细胞株的数据供比对。越来越多的杂志在投稿时要求撰稿人提供细胞STR分析数据,STR已被ATCC等机构作为细胞鉴定的金标准。
什么是细胞系STR鉴定?
● STR(Short tandem repeats,短串联重复序列)基因位点由长度为3~7个碱基对的短串联重复序列组成,这些重复序列广泛存在于基因组中,可作为高度多态性标记,被称为细胞的DNA指纹,其可通过PCR(聚合酶链式反应)来检测。
● STR基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分,在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法,所得的STR分型结果与权威的细胞STR数据库比对,从而推算出样品所属的细胞系。
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鉴定流程
什么时候需要细胞系STR鉴定?
发表文章或申请课题经费前;
使用细胞进行临床治疗(试验)前;
准备冻存保种或已冻存多年的细胞;
一个涉及到细胞试验项目开始/结束时;
新得到的细胞或实验室培养5代以上的细胞;
细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大;
异体细胞移植后嵌合情况检查。
这样将避免由于细胞系交叉污染或身份误认,导致的金钱、时间的浪费和无效实验数据的产生。
人源细胞的鉴定-STR鉴定
STR基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定,目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准,可以通过多重荧光PCR技术,对人源常见的20个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。
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小鼠细胞的鉴定-STR鉴定
国内STR基因分型常见人类STR,当科研用到小鼠源细胞,该怎么提供STR鉴定结果呢?
赛库是国内首家推出小鼠源细胞STR鉴定的生物公司,参考ATCC细胞鉴定金标准ANSI/ATCC ASN-0002-2011——STR基因分型技术,创建小鼠源细胞DNA指纹检测系统,联用18个位点(人源细胞系鉴定我们采用21位点),多种荧光探针标记,精准鉴别小鼠源细胞。赛库生物拥有5年以上细胞鉴定经验,为您提供专业的细胞鉴定服务。
样品要求
样品要求
活细胞:T25培养瓶,60%-70%密度,细胞数>106个,寄出前灌满培养基封口膜密封盖子,常温运输。
细胞沉淀/冻存细胞:细胞数量需≥106,干冰运输。
DNA样本:OD260/OD280=1.8~2.0,DNA浓度≥50ng/uL,DNA体积≥20uL。
赛库生物--小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒发明专利