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细胞学堂|Caco-2人结直肠腺癌细胞的生长特性及常见问题
发布日期:2022.11.18

图一:ATCC中Caco-2细胞形态

 

Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌。当细胞长满时,表现出典型的肠细胞分化的特征。Caco-2细胞表达维生素A酸结合蛋白Ⅰ和视黄醇结合蛋白Ⅱ,角蛋白阳性。

 

本文为大家介绍Caco-2生长特性和常见问题解决策略。

 

 

 

生长特性

 

 

呈岛状生长,Caco-2细胞群的边界光滑

 
 
图二:Caco-2 细胞边界不清晰  100x

 

 

 

空泡多

 

Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡,这是细胞本身的特性,属于正常现象。

 
 
图三:Caco-2 细胞  空泡多  200x

 

 

 

难消化

 

Caco-2细胞与细胞间连接紧密,细胞难以消化解离。生长时间越长,细胞间连接越紧密,消化时间越长。消化时间为5-10分钟,该细胞难以被吹散为单个细胞,当细胞能够被吹散为小的细胞团块,即可终止消化。

 

图四:Caco-2 细胞难消化 200x

 

 

生长周期长

 

Caco-2传代周期较长,倍增时间约为72h。Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:3传代的情况下,约一周传代一次。

 

 

 

 

Caco-2有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上,是正常的,随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞,可以减少漂浮细胞产生。如果细胞随着培养过程,漂浮得越来越严重,甚至大块儿飘起,就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常。细胞密度越高,消化时间越长。

血清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选用高质量的胎牛血清。

 

 

 

培养条件

 

 

培养体系:DMEM,HIGH GLUCOSE   10%胎牛血清(南美级别)。

传代比例:不高于1:3传代(培养面积比)。

传代方式:消化5~10分钟。

换液频率:每周换液1-3次。

倍增时间: 3~4天(ATCC);~80小时(DMSZ);~32小时(PBCF);~60-70小时(CLS)

冻存液配方:DMEM,HIGH GLUCOSE+10%FBS+10%DMSO

 

 

 

培养要点

 

 

 

该细胞贴壁较慢,在复苏或传代初期,若有许多细胞或细胞碎片漂浮为正常现象,为避免在细胞附着初期干扰细胞,建议到第三天才换液。待细胞贴壁后,一周即可长满(1:3传代),若细胞生长过慢,可适当调整血清浓度到20%。

 

 

 

常见问题

 

 

Lisa

细胞不贴壁怎么办?

Caco-2培养基里添加的胎牛血清比例为10%,当血清比例降低,贴壁性下降时,补充胎牛血清至20%,继续培养1-2天,细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱(呈紫红色),偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁。

赛库生物

 

Lisa

漂浮细胞多怎么办?

有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上,是正常的,随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞,可以减少漂浮细胞产生。如果Caco-2细胞随着培养过程,漂浮得越来越严重,甚至大块儿飘起,就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。

赛库生物

 

 

 

注意事项

 

 

1、细胞贴壁慢特别是刚复苏时,一般2-3天贴壁展开,会有空泡。

2、细胞在传代细胞中,注意消化散,否则难以贴壁。

3、成团生长,细胞密度越大,表面空泡黑点越多。

4、一般细胞长至80%传代,细胞成片,其实密度很大。

5、细胞生长太满对细胞状态影响严重,传代后易碎,死亡。

6、细胞生长时间越长,消化时间越长。

 

 

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