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细胞培养基是盐、碳水化合物、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素的复杂混合物。不同细胞系对这些成分的要求各不相同,因此产生了不同类型的培养基。碳水化合物主要以葡萄糖的形式提供。在某些情况下,用半乳糖代替葡萄糖以减少乳酸的积累,因为半乳糖的代谢速度较慢。其他碳源包括氨基酸(特别是L-谷氨酰胺)和丙酮酸。
除了提供营养物质,培养基还能够维持培养系统中的pH值和渗透压。pH值由1个或多个缓冲系统维持,常见的有:CO₂/碳酸氢钠、磷酸盐和HEPES。通常情况下,会在培养基中加入酚红作为pH值指示剂,监测pH值的变化。
是一种添加了营养物的最低必需培养基,仅含有12种必需氨基酸、L-谷氨酰胺和8种维生素,含糖量为1g/L。MEM是一种最基础、最常用的细胞培养基,主要应用于贴壁细胞的培养,在添加血清后,可用于培养多种单层生长的细胞,如成纤维细胞。修改配方后的a-MEM则可广泛应用于各种哺乳动物悬浮和贴壁细胞培养。
氨基酸含量是MEM的两倍,维生素含量是MEM的4倍,以及硝酸铁、丙酮酸钠和一些补充氨基酸。此外,DMEM分为低糖型和高糖型,葡萄糖含量分别为1g/L和4.5g/L。(低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养;高糖更适合高密度悬浮细胞培养,也适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。)
用于淋巴细胞和杂交瘤细胞的生长。与DMEM相比,添加了HEPES和硒,硝酸钾取代了硝酸铁,并且含有更多的氨基酸、维生素和无机盐。
用于支持原代细胞的生长和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、钙、镁、腐胺和酚红的含量。
DMEM和F12的1:1混合物,能够在低血清条件下支持多种哺乳动物细胞的培养,在此培养基中成功培养的细胞包括:MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞和人内皮细胞等。
广泛用于多种原代细胞及细胞系的培养,如来源于骨髓、皮肤、脾脏、肾脏和肺等组织的哺乳动物原代细胞。
是在McCoy’5A的基础上进行改良研发出的,最初用于人白血病细胞的悬浮培养,后来发现也适用于HeLa、MCF-7、PC12、外周血单核细胞(B/T淋巴细胞)和星形细胞的培养。RPMI 1640与其它培养基的区别是含有还原型谷胱甘肽和高浓度维生素。此外还含有含有MEM、DMEM中不含的生物素、维生素B12和对氨基苯。
L-15培养基的配方中不含用于CO2平衡环境的碳酸盐缓冲系统, 而是用磷酸盐、L-精氨酸、L-组氨酸和 L-半胱氨酸作为缓冲剂。用半乳糖和丙酮酸钠代替葡萄糖以防止乳酸的形成。可以在无CO2培养箱中进行细胞培养,或者拧紧瓶盖培养。
赛库在售基础培养基产品目录
CM2001 | L-15培养基 | Leibovitz's L-15 Medium |
CM2002 | 5A培养基 | McCoy's 5a Medium |
CM2003 | Alpha MEM培养基 | Alpha MEM Medium |
CM2004 | F-12K培养基 | Ham's F-12K Medium |
CM2005 | DMEM/F-12(不含酚红)培养基 | DMEM/F-12(no phenol red) Medium |
CM2006 | 1640(改良型)培养基 | RPMI 1640 Medium(modification) |
CM2007 | DMEM(改良型)培养基 | DMEM Medium(modification) |
CM2008 | Grace's昆虫细胞培养基 | Grace's Insect Medium |
CM2009 | K-SFM培养基 | Defined Keratinocyte-SFM ,Serum-Free |
CM2010 | 气道上皮培养基 | Airway-Epi Medium |
CM2011 | IMDM培养基 | IMDM Medium |
CM2012 | DMEM/F12培养基 | DMEM/F12 Medium |
CM2013 | F12培养基 | HAM’s F12 Medium |
CM2014 | M199培养基 | Medium 199 |
CM2015 | MEM 培养基 | MEM Medium |
CM2016 | DMEM(高糖)培养基 | DMEM Medium(high glucose) |
CM2017 | RPMI 1640培养基 | RPMI 1640 Medium |
CM2019 | Waymouth培养基 | Waymouth's Medium |
CM2020 | DMEM(低糖)培养基 | DMEM Medium(low glucose) |
葡萄糖:用于细胞能量代谢。
CO2:细胞需要少量的二氧化碳来维持生长。
在培养基中,溶解的CO₂与碳酸氢盐离子处于平衡状态,许多培养基利用了这种CO₂/碳酸氢盐反应来缓冲培养基的pH值。CO₂溶解在培养基中,与水反应生成碳酸。随着细胞代谢产生更多的CO₂,随着下面的化学反应向右驱动,介质的pH值下降:
通过向培养基中添加碳酸氢钠,可使pH值维持在7.2 ~ 7.4的最佳范围:
酚红:用于监测培养基的pH值。
在细胞生长过程中,由于细胞释放的代谢物改变了pH值,培养基的颜色也随之改变。在较低的pH值下,酚红会变成中黄色,而在较高的pH值下,它会变成中紫色。对于大多数培养体系(pH为7.2 ~ 7.4),培养基应为鲜红色。(部分特殊培养基不添加酚红,例如对雌激素敏感的乳腺组织细胞,酚红会发挥跟类固醇相似的功能从而影响细胞。)
L-谷氨酰胺:
几乎是所有哺乳动物和昆虫细胞所必需的氨基酸,用于合成蛋白质,参与核酸代谢。它相比其他氨基酸更不稳定,容易降解,降解的速率和程度与储存温度、时间和pH值有关。
非必需氨基酸NEAA:
所有的培养基配方都含有10种必需氨基酸以及半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培养基中还需要加入其他非必需氨基酸(丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸)可以减少细胞的代谢负担,从而增加细胞增殖。
丙酮酸钠:
丙酮酸是糖酵解过程中的中间有机酸代谢物,可以轻易地进出细胞,可以为合成代谢过程提供能量来源和碳骨架。大多数培养基中丙酮酸钠的最终浓度为1mM,但在L-15培养基中增加到5mM,方便在无CO2环境中使用。
用于预防细胞污染
作为细胞培养的添加剂,可促进细胞增殖、延长细胞寿命,增加蛋白和核酸的表达量。
可降低多种细胞常规维持和低密度贴壁培养时所需的胎牛血清浓度。
一种抗炎糖皮质素,对细胞存活、细胞信号传导和基因表达具有一系列的影响。用于研究细胞凋亡、细胞信号传导通路和基因表达。
促进表皮上皮细胞和乳腺上皮细胞增殖生长,提高神经胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率。
IL-2作为T细胞生长因子,可增强NK细胞的细胞溶解活性,并促进B细胞产生免疫球蛋白。常用于NK92细胞的培养。
赛库在售培养基添加因子产品目录
CM1005 | 青霉素-链霉素(双抗),100X | Penicillin-Streptomycin,100X |
CM1006 | 胰酶 EDTA溶液(0.25%),含酚红 | Trypsin-EDTA(0.25%), phenol red |
CM1007 | 重组人胰岛素,干粉 | Recombinant Human Insulin, powder |
CM1008S | 非必须氨基酸(NEAA),100X | Non-Essential Amino Acids Solution, 100X |
CM1009 | 100 mM 丙酮酸钠 ,100X | 100 mM Sodium Pyruvate,100X |
CM1010 | L-谷氨酰胺(200 mM) | L-Glutamine(200 mM) |
CM1011 | 氢化可的松(0.4mg/ml) | Hydrocortisone(0.4mg/ml) |
CM1013 | 重组人表皮生长因子(20ug/ml) | Recombinant Human EGF(20ug/ml) |
CM1014 | 重组人白介素2(100U/ul) | Recombinant Human IL-2(100U/ul) |
CM1015 | 肾上腺素(100mM) | Epinephrine(100mM) |
CM1019 | 地塞米松(40ug/ml) | 地塞米松(40ug/ml) |
CM1024 | 嘌呤霉素Puromycin(1mg/ml) | 嘌呤霉素Puromycin(1mg/ml) |
添加剂通常制备为100×(或更高)的原液,分装储存。
添加剂可以改变培养基的渗透压,建议在加入添加剂后,重新检查渗透压,大多数脊椎动物细胞系的最佳渗透压位于260 - 320 mOSM/kg之间。
添加补剂后,完全培养基的有效期应根据实际情况来确定。例如,普通完全培养基有效期为1~2个月,而添加有胰岛素的完全培养基,根据胰岛素的降解速度,有效期缩短至2周。
在-80℃或以下冷冻培养基会使一些生长因子和维生素从溶液中析出。即使加热到37ºC,解冻后也很难让这些成分回到溶液中。建议将培养基避光储存在4ºC。
每株细胞建议使用ATCC等数据库或原购买所推荐的培养体系,避免细胞因为培养基的改变,导致生长状态不佳、形态改变或分化等情况的发生。
培养基使用效果不佳:应定期确认培养基有效期,并确认是否使用细胞相应的培养基,培养基使用不当会影响细胞状态。例如,293T需用高糖DMEM培养,而THP-1则需要用RPMI 1640培养!
培养基使用时应储存于4ºC并分装,避免反复升温加速谷氨酰胺的降解。
不同培养基由于成分不同,颜色也不尽相同,例如DMEM呈鲜红色,而MEM呈粉红色。
细胞培养过程中,可根据细胞培养基颜色变化,对培养状态进行分析,当培养基显著变橙色甚至黄色时,说明细胞代谢产生了大量酸性物质,需及时更换新鲜的完全培养基。
培养基开封,或者培养皿/瓶从培养箱中取出时,由于和空气发生气体交换,颜色会变为紫红色,放到CO2培养箱中即可恢复pH值,颜色变为正常的鲜红色。
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