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细胞学堂 | 听说NK-92和NK-92MI很难养?
发布日期:2022.08.08

NK(Natural killer)细胞,也称自然杀伤细胞,因为其非专一性的细胞毒杀作用而被命名。形态上属于大颗粒淋巴细胞,来源于骨髓,是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞,约占血液中所有免疫细胞(白细胞数量)的15%,属于天然免疫系统的核心细胞,主要分布于外周血、肝脏和脾脏。

 

NK细胞具有部分T细胞分化抗原,如80%~90%的NK细胞呈CD2+,以及75%~90%的NK细胞呈CD38+,而且NK细胞具有IL-2中亲和性受体,在IL-2刺激下可发生增殖反应,活化的NK细胞可产生IFN-γ。NK细胞是人体抵抗癌细胞和病毒感染的第一道防线,可非特异性识别并消除肿瘤细胞,这种天然杀伤活性无MHC限制,也不需要抗体参与。除了具有强大的杀伤功能外,NK细胞还具有很强的免疫调节功能,与机体其他多种免疫细胞相互作用,调节机体的免疫状态和免疫功能。

 

 

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图片来源于网络

 

 

 
细胞背景介绍
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

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NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2(IL-2)依赖型的NK细胞株。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562和DAUDI细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。

 

NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。

 

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NK-92/MI细胞,是通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA对NK-92进行转化,得到的IL-2非依赖的NK细胞株。

 

 

 

NK92:100X;200X

 

 

 

 

 
细胞特性及培养注意事项
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

01
细胞特点
 
 
细胞偏圆或偏椭圆,透亮,成团生长。只有成团的细胞有增殖活性,单个的细胞基本没有增殖活力。细胞团可生长成肉眼可见的大团块,死了的细胞会皱缩,不再透亮而变得灰暗。细胞对氧气、养分及细胞密度非常敏感,养分不够或密度太高情况下,细胞很容易凋亡。

 

02
细胞培养技巧
 
 
1、细胞刚复苏或密度较低时:可以把培养瓶立起来培养,以提高细胞密度,促进细胞聚团。当细胞聚团正常生长后,建议平躺着培养该细胞,以增大空气交换面积,且液体高度最好不要超过3mm,一般T25培养瓶加6-8ml培养基,T75培养瓶加15ml左右培养基即可。
 
2、换液:2-3天换液一次。
半换液法:换液时轻轻侧过培养瓶/皿,避免晃动细胞,用巴氏吸管轻轻吸取部分上清弃去,补加等体积的新鲜培养基继续培养;
 
离心法:将全部培养液转移至离心管中,1000rpm离心5min,吸去上清后用新鲜培养轻轻重悬后重新种瓶,重悬时不可吹打过度。
 
3、传代:细胞团长至肉眼可见,且T25瓶子有几十上百个小团时,细胞数量已经比较多,此时应该2天换液一次。当一个20倍视野有4-5个大细胞团时应该进行传代。传代时加入两倍体积的新鲜培养基后,轻轻吹打细胞团,将大的细胞团打散成小团,但不要剧烈吹打成单细胞悬液,因为单个的细胞是基本没有增殖活力的细胞,然后将混匀的细胞悬液转移至新的培养瓶中。或者将细胞悬液转移至离心管中,1000rpm离心5min后,弃去上清,加入三倍体积的新鲜培养基轻轻重悬后转移至三个新的培养瓶中。
 
4、吹打操作注意事项:细胞团块需要吹散,但不用刻意吹散成单颗;正常传代或者离心换液后吹打,控制吹打次数以及力度,即使细胞都分散成单个,也会在1~2天内聚集起来;建议只在细胞产生大量碎片时才离心清洗。
 
5、复苏:复苏时可适当加大胎牛血清的含量,以使细胞尽快长起来。复苏后细胞需要重新聚团,故复苏时间较长,期间应多加观察,并注意更换培养基,频率为3天一换(半换液法)

 

 

 
NK-92和NK-92MI的区别
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

1、NK-92生长依赖于IL-2,而NK-92MI不依赖;
2、NK-92生长速度较慢于NK-92MI;

3、冻存液配方:冻存时细胞数量应在0.5-1.0×106/ml

 

NK-92:50%胎牛血清+40%完全培养基+10%DMSO

NK-92MI:90%胎牛血清+10%DMSO。

 

 

 

 
IL-2使用注意事项
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

1、NK-92细胞对IL-2敏感,建议使用高质量IL-2。
2、NK-92MI正常培养时不需要添加IL-2当细胞状态较差时,可按200U/ml的浓度添加IL-2,培养2-3天后细胞状态改善即可正常培养。

3、IL-2保存于-20℃,4℃保存不超过两周。

4、含有IL-2的完全培养基建议现用现配或保存于4℃冰箱中两周内用完,使用前恢复至室温即可,切勿加热。

 
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