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细胞学堂 | RAW264.7和THP-1细胞
发布日期:2022.07.22


细胞背景介绍

RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞),是由加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立的,是最常见的炎症细胞模型之一[1]。RAW264.7细胞一般为圆形或椭圆形,颜色较深,贴壁牢固。RAW264.7细胞具有较强的吞噬能力,在吞噬抗原后,细胞会释放出趋化因子,促使分化,细胞伸出伪足,攀爬能力增强。在细胞培养过程中,细胞吞噬抗原过多、培养条件恶劣或传代后细胞稀疏等情况,都会使细胞呈现出梭形、长梭形的形态,消化难度增加。

 

THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的,自1980年建系以来,THP-1细胞被广泛应用于单核细胞和巨噬细胞的相关机制、免疫和炎症信号通路等研究中。THP-1细胞为悬浮细胞,相比于ML-2、HL-60、U937等白血病细胞系,THP-1细胞具有更接近于人原代单核细胞的形态和功能特征(包括细胞分化标记)。并且相对于人外周血单核细胞(PBMC),THP-1更易在实验室中培养和扩增,且具有更稳定的基因背景,不存在PBMC的个体差异性问题,利于实验结果的重现。因此,THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系,是研究免疫和炎症的理想工具。

 

细胞用途--诱导分化
 

RAW264.7细胞

RAW264.7被广泛应用于破骨细胞的研究,在具体的诱导RAW264.7向破骨细胞分化的实验中,主要用到的诱导因子是RANKL,同时最好选择低传代代数的RAW264.7细胞,当代数超过20代时,RANKL几乎无效。

破骨细胞具有骨吸收(bone resorption)的功能,破骨细胞功能异常会造成骨质吸收的异常,若其功能亢进,会引起骨退行性病变如骨质疏松症、癌症的骨转移、关节炎等;若其功能障碍或衰退,会造成骨硬化症、致密性成骨不全、Pagets病、大块骨溶解病等。因此借助RAW264.7的可诱导分化能力,加深对破骨细胞的研究,能够帮助我们更好的对相关疾病进行预防和治疗。

 

THP-1细胞


在科学研究中,THP-1细胞常被诱导分化为M1和M2型巨噬细胞和泡沫细胞,用于炎症的研究。在具体的诱导分化实验中,THP-1首先被佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,随后进行下一步实验:

I    诱导为M1型巨噬细胞:通过脂多糖(LPS)和IFN-γ诱导巨噬细胞进一步发生M1型极化,释放出TNF-α、IL-6等细胞因子,这是经典的炎症模型。

I    诱导为M2型巨噬细胞:通过 IL-4 、IL-13和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导巨噬细胞进一步发生M2型极化,分泌TGF-β、IL-10等抑制性细胞因子,模拟炎症后期的组织修复和重建的过程。

I    粥样硬化慢性炎症模型:在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的作用下,巨噬细胞可进一步形成泡沫细胞,泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化形成的早期事件,属于慢性炎症模型。


细胞特性及培养注意事项

RAW264.7细胞 

状态正常的细胞是开展科研的基础!养过RAW264.7细胞的小伙伴们一定都会发现,这株细胞非常容易分化,影响细胞状态和后续实验,那我们应该如何合理培养这株细胞呢? RAW264.7细胞对胰酶不敏感,细胞传代时推荐使用细胞刮刀。I  RAW264.7细胞通常会连片生长,散布在培养瓶/皿中。传代时,保证中等密度接种,调整细胞传代比例,避免因细胞过稀导致生长缓慢等情况的发生。
I  培养时注意观察细胞形态,当发生细胞由圆形或椭圆形变为四角形,或伸出伪足等情况时,说明细胞状态改变,需及时传代,以免产生不可靠的实验数据。 

THP-1细胞 

 THP-1细胞比较敏感,培养时要小心操作,保证培条件的稳定,让我们来看一下培养过程中的细节和注意事项吧! THP-1细胞在酸性环境中生长速度较快,当培养基呈橘红色时,适宜细胞生长。培养基中需添加β巯基乙醇。I  THP-1细胞对血清品质要求较高,推荐使用优质胎牛血清。
I  THP-1细胞具有密度依赖性,培养密度较低时细胞生长缓慢。
I   THP-1细胞传代采取半换液法,摇匀细胞后,均分到两个瓶子里,每瓶再补加等量培养基。当细胞碎片较多时,采取离心法按比例将细胞接种到新的培养中。
I  THP-1细胞易受冻存影响,因此应选择细胞状态良好时冻存,并适量增加冻存的细胞量,以提高复苏存活率。
I  THP-1细胞复苏后通常需要3-5天的时间恢复状态,建议复苏后48小时不要接触细胞,晃动培养瓶/皿,以免影响细胞状态。   

细胞接收后常见问题


Q:收货后,细胞形态发生改变?
A:受运输的影响,细胞培养条件改变,细胞会出现暂时的形态改变的情况,后续改善细胞培养环境,传代并稳定培养后,细胞可恢复正常的形态。


Q:RAW264.7细胞复苏注意事项?
A:RAW264.7细胞对空间状态很敏感,复苏后及时观察细胞生长密度,当密度达到70%-80%时进行传代。
 

Q:细胞生长缓慢?
A:细胞传代时,如果汇合度较低,会导致细胞生长缓慢。因此可通过减小培养面积、增加细胞接触等方式提高细胞密度,促进细胞生长。


Q:THP-1细胞发生贴壁现象?
A:少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液重新接种到新的培养瓶/皿中即可。当贴壁细胞比例超过20%,说明细胞生长状态异常,需要排查细胞培养过程中可能出现的各种问题。


Q:THP-1细胞出现聚团生长的情况?
A:少量细胞聚团生长属于正常现象,特别是细胞密度较低时容易发生。建议更换血清品牌,并适量提高完全培养基中的血清比例(不超过20%),当细胞密度增加后,聚团现象将自发改善。


Q:收货后RAW264.7贴壁性差?
A:RAW264.7细胞有一定的聚团生长的特性,聚团后不容易贴壁。可以离心收集细胞,随后用1mL培养基重悬,轻柔吹打直到细胞被吹成单细胞,就可以重新铺板了。

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