稳定细胞株构建

稳定细胞株构建

采用的慢病毒载体属于“第三代”慢病毒载体(慢病毒介绍),其基因组的3’LTR的增强子功能发生了缺失,从而形成了所谓的“自灭活”(Self-inactivation,SIN),即该病毒基因组整合到细胞基因组后,不会产生新的子代病毒,也降低了对周围基因的意外激活,因此具有较好的安全性。

慢病毒载体系统由表达载体pLenti-gene、包装辅助载体pGag/Pol和pRev、包膜载体pVSV-G四质粒组成。可以根据实验目的采用不同的表达载体pLenti-gene,如基因表达研究采用pLV-Gene、RNA 干扰采用pLV-U6等进行研究。pGag/Pol载体中含有HIV 病毒的gag 基因,编码病毒主要的结构蛋白;pol 基因,编码病毒特异性的酶;pRev 载体编码rev 基因,是调节gag 和pol 基因表达的调节因子。pVSV-G载体中含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G 基因,提供病毒包装所需要的包膜蛋白。

稳定株构建

 

服务流程:

  1. 含目的基因的载体质粒pLV-gene的构建和纯化提取;
  2. pLV-gene、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞包装病毒;
  3. 培养48~72h,收集培养含病毒上清;
  4. 慢病毒载体的纯化和浓缩(超离和/或超滤);
  5. 分装、-80℃保存;
  6. 滴度测定、目的基因检测;
  7. 感染目的细胞;稳定细胞株构建。

 

 

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