细胞冻存液(即用型)

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细胞冻存液(即用型)说明书

 

目录号 产品名称 规格 说明 储存条件及年限
CM1004 细胞冻存液(即用型) 100ml 含血清含DMSO -20℃ 一年

 

细胞冻存/解冻操作流程

※建议冻存细胞密度为1×106107/ml

※针对原代细胞、干细胞、PBMC等敏感类型的细胞,建议先进行至少为期1周的试验性细胞冷冻保存试验,确认性能后再正式使用。

※收到后,建议按每次使用量需求进行分装,避免反复冻融。

(本产品含酚红,低温下酚红析出显血清的黄色,随温度的上升逐渐溶解显出粉红)

  1. 一. 冻存
  2. 细胞悬液在室温以1000rpm(或80-100g RCF)离心5分钟。
  3. 轻轻吸走上清液,注意不要扰动细胞团。
  4. 吸取1mL细胞冻存液重悬细胞,轻柔打散细胞团。
  5. 将重悬的细胞悬液转移到标记好的冻存管中。
  6. 用以下方法冻存细胞:

4℃放置15-30分钟

一定不能省略该步骤,否则冻存液无法完全渗透过细胞膜进入细胞起保护作用)

  • 缓速降温方法(以使用需异丙醇的Nalgene程序降温盒为例,冷冻细胞的过程中可以辅助实现缓慢降温,以达到近似于1℃/分钟):-80℃过夜→液氮长期保存。

(不推荐在-80长期保存;异丙醇易挥发,并且容易吸收空气中的水分,建议使用5次后更换)

  • 逐步降温法:-20℃保存2小时,然后-80℃中保存2小时,随后可以在-196℃液氮中长期保存。

 

  1. . 解冻

开始之前,提前准备好实验材料,确保整个解冻复苏程序可以在最短的时间内完成。

注意:不要在37水浴中加热培养基。

  1. 在37℃水浴中快速解冻,持续温和地在水中晃动冻存管,直到剩余少量细胞还处于结

冰状态。

(操作该步骤时,请佩戴护目镜或护目面罩,以防急剧气化的液氮使冻存管炸裂,造成致残性伤害)

  1. 水浴中取出冻存管,用75%的酒精或异丙醇擦拭管身除菌。
  2. 将细胞悬液转移到15mL离心管中。
  3. 逐滴加入5-7mL已回复至室温的培养基到15mL离心管中,加入的同时轻轻混匀。(缓慢逐滴加入培养基可防止DMSO急剧稀释而放热导致细胞受损)
  4. 室温1000rpm(或80-100g RCF)离心5分钟。
  5. 吸出培养基,注意不要扰动细胞团。加入足够量的复温培养基重悬细胞团。
  6. 将细胞悬液接种于细胞培养器皿上。
  7.  将培养器皿放入37℃培养箱。快速前后左右的摇晃数次,将细胞分布均匀。24小时内不要移动培养器皿。

 

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