目录号 ME01
英文名字 MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent
保存温度 -20℃
效期 12monthes
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产品参数
目录号
ME01
英文名字
MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent
保存温度
-20℃
效期
12monthes
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产品详情

产品包装

Cat No.

组分

规格

ME01A

MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent

125mg

ME01B

MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent

125mg X 5


产品概述

支原体污染是细胞培养中常遇到的问题。支原体污染可以改变细胞的特性。例如部分支原体会快速消耗培养基中的精氨酸,与细胞竞争营养,从而使细胞的生长速度减慢或停止;同时支原体还可以改变细胞的酶谱、细胞膜成分,造成细胞染色体异常或细胞病理性改变等。上述情况会严重影响到使用这些细胞所做实验的结果,导致结论不可靠。

本产品是复合抗生素制剂,含有两种有效成分,分别作用于支原体的核糖体,抑制蛋白质的合成,破坏细胞膜的完整性;及作用DNA螺旋酶,抑制支原体DNA的合成和复制。且所含组份可穿透哺乳动物细胞膜,可同时除去游离形式及胞内的支原体,从而确保经过处理的细胞不会被胞内释放的支原体再次感染。1-2周即可杀灭90%以上的支原体,且对细胞毒副作用少。同时,本产品对革兰氏阴性及阳性菌均有抑制作用。


配套产品:支原体检测试剂盒MycoScan Mycoplasma Detection Kit(Cat No.:MT01A)



使用方法

在无菌条件下,把一管去除试剂粉末(125mg)加入10ml灭菌水,振荡溶解,配成100X储存液,过滤分装后-20保存。使用时按1:100的比例加至培养基中,配制成1X的工作培养基。

细胞传代时,离心去除培养上清后,用1X的工作培养基正常培养及传代1-2周。传代时用PBS洗细胞1-2次可提高支原体清除效率。


建议

1.     用本产品处理细胞至常规检测结果为阴性后,因仍可能有痕量支原体残留,应再处理1周,并继续检测。若检测结果仍为阴性,可尝试撤去试剂正常培养2周,同时维持检测频率,确保结果没有反弹。正常培养2周后,若结果均为阴性,则该细胞为完全治愈,可减少检测频率。这样为一个完整的治疗过程。若出现反弹,细胞需要重新开始一个完整的疗程。

2.     在实验室条件允许情况下,用两台培养箱分别培养受感染与“干净”的细胞,在做去除处理的细胞暂时与受感染的细胞放一个培养箱,至检测结果为阴性后,转至另一培养箱观察。同样,如果条件允许,分别在不同的超净台处理受感染和“干净”的细胞,耗材及试剂也应分开使用。若条件不允许,也尽可能做到受感染的、在做去除处理的与“干净”的细胞分层放置。不同的细胞分开处理,优先处理“干净”的细胞,后处理在做去除的和受感染的细胞。试剂分开使用,“干净”的细胞优先使用耗材,已开封但未使用完的耗材只处理受感染的细胞,尽最大可能减少交叉感染的可能性。

3.     操作人员应具备一定的技术素养。要想建立一个没有支原体污染的细胞间,就得有长期作战的思想准备。不仅支原体污染的去除需要时日,平常还需要坚持不懈地进行常规检测,确保细胞没有支原体污染。即使有,也可以做到及早发现,及早处理。坚持规范的操作,不要有侥幸心理,才有可能构建一个没有支原体污染的细胞培养平台。


常见问题

1.     为什么做去除处理后培养基中的黑点没有减少?

答:目前学术界对黑点是什么尚无定论,有人认为是细胞碎片,也有人认为是无机物、真菌、细菌甚至是黑胶虫等等,而黑点的出现与支原体感染的相关性也没有文献报道。所以黑点的多少不能反映支原体的多少。

2.     为什么会出现细胞反复感染的情况?

答:支原体可以通过气溶胶传播,和受感染的细胞共用试剂与耗材极易产生交叉污染的问题,从而导致刚杀灭支原体的细胞恢复正常培养后被重新感染。而人体的皮肤及口腔中也存在支原体,不规范的操作(如不戴手套处理细胞、操作过程中不戴口罩并随意交谈等),都很容易将刚杀灭支原体的细胞重新感染。因此,树立严格的操作规范并坚持执行才是避免细胞反复感染的有效途径。


去除效果示例

ME01.jpg

注:MMarker I1为阳性对照;2为未处理的受支原体感染细胞;3为处理1周后的细胞


产品说明书


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