支原体检测试剂盒
目录号 MT01
英文名字 MycoScan Mycoplasma Detection Kit
保存温度 -20℃
效期 6monthes
立即订购
产品参数
目录号
MT01
英文名字
MycoScan Mycoplasma Detection Kit
保存温度
-20℃
效期
6monthes
我知道了
产品详情

产品包装

组分

体积

MT01T10rxns

MycoScan PCR Master Mix 2X

125ul

MycoScan Positive Control 1X

5μl

MT01A50rxns

MycoScan PCR Master Mix 2X

625ul

MycoScan Positive Control 1X

25μl


产品概述

支原体污染是细胞培养中常遇到的问题。支原体污染可以改变细胞的特性。例如部分支原体会快速消耗培养基中的精氨酸,与细胞竞争营养,从而使细胞的生长速度减慢或停止;同时支原体还可以改变细胞的酶谱、细胞膜成分,造成细胞染色体异常或细胞病理性改变等。上述情况会严重影响到使用这些细胞所做实验的结果,导致结论不可靠。

支原体检测方法包括培养法、荧光染色法、代谢产物检测法、PCR法等。其中培养法检测需时3周以上,且有一些支原体不形成菌落,无法检测其存在与否;荧光染色法灵敏度低,且需要昂贵的荧光显微镜;代谢物检测法的灵敏度也不高,同时完全培养基中添加的血清在制备过程虽然滤去了支原体,但仍可能因残留的代谢物而产生假阳性,且该方法成本较高。上述方法都不太适合实验室对细胞进行常规的支原体检测。PCR法只需普通的PCR仪和电泳仪,且对技术要求不高、耗时短、费用低,适合实验室在细胞培养过程中对支原体污染进行日常防控。

本产品采用PCR检测法,其原理是根据支原体的保守序列设计引物,进行PCR扩增,最后通过凝胶电泳检测特异性条带的有无。本产品可同时检测40多种支原体,其中包括了细胞培养过程中最常被感染的8个品种。检测下限低至10个拷贝(检测示例见本说明书第4页图1),准确率达99%3小时即可获得检测结果。


配套产品:支原体去���试剂MycoFree Mycoplasma Elimination Reagent(CatNo.: ME01A)



使用方法

1.   样品前处理

细胞正常培养2天(3天效果更佳)后,吸取1ml培养上清,3000rpm离心5min,使细胞碎片沉淀。收集500μl上清至一新的1.5ml离心管,100℃沸水浴10min以裂解支原体释放DNA。冷却至室温以进行下一步骤。

2.   PCR反应

         1)反应体系

    2X PCR Mix                   12.5 μl

    步骤1 收集的上清裂解液      2.5μl

  无菌水                      定容至25μl

注:整个检测体系中应加入阳性及阴性对照,阳性对照随试剂盒附赠,阴性对照建议使用新鲜的基础培养基或灭菌水。阳性对照上样1μl即可。

2)反应条件

94 2min

       9430sec

       55 15sec      40cycles

       72 30sec

       72 5min

3. 电泳检测

1.5-2%琼脂糖电泳检测,280bp处出现条带为阳性结果,没有条带则为阴性结果。


注意事项

1.     检测样品应为正常培养2-3天后的细胞上清,以确保痕量的支原体在培养过程中得到扩增。

2.     为防止出现假阳性或假阴性结果,每次检测都应设置阳性及阴性对照

3.     为保证检测效率,防止细胞基因组DNA产生的杂带干扰,建议进行样品前处理再进行PCR扩增。

4.     收集的培养上清可短暂保存在4℃,一周内检测不影响结果。煮沸后释放的支原体DNA因浓度低而不稳定容易降解,易产生假阴性结果。因此,经过前处理的样品应在当天完成检测。

5.     建议新引进的细胞系都进行支原体检测,确保不污染实验室未受支原体感染或已去除感染的细胞。在养细胞每月检测一次并结合每周抽检,做到有污染早发现。对于正在进行支原体去除处理的细胞建议每周必检,直至出现阴性结果并至少维持一月,后改为每月检测一次并结合每周抽检。


常见问题答疑:

1.     电泳后280bp处出现模糊的阴影带,怎么处理?

:建议重新收取已正常培养2-3天的培养上清检测。


2.     为何电泳后出现梯状杂带,大小不在280bp处?

:存在细胞基因组DNA的干扰,建议进行前处理之后重新扩增,以消除细胞基因组DNA的干扰。


3.     为什么在光镜下看到黑色颗粒物,但PCR检测的结果却是阴性?

:对于黑色颗粒物学术界尚无定论,有人认为是黑胶虫,或细胞碎片,甚至是无机物、真菌等等,所以出现黑色颗粒物并不代表细胞已受支原体感染。


4.     为什么用PCR法检测的结果与其它试剂盒的结果不一致?

:因为检测的原理不一样,如有的检测试剂盒是检测支原体特异代谢物,虽然完全培养基中添加的血清在制备过程中可以滤去支原体,但其产生的代谢物仍可能残留,就会出现假阳性,产生不一致结果。

检测示例

MT01.png

1. 检测试剂盒灵敏度检测电泳图


产品说明书


想订购需求?戳这里……

产品遇到问题了?需要售后?快来这……