慢病毒技术简介

2020-11-10 09:52
5


慢病毒属(lentivirus)在分类上属于逆转录病毒科,为二倍体RNA病毒。原发感染的细胞以淋巴和巨噬细胞为主,导致感染个体发病。慢病毒感染的主要临床特点是在出现典型的临床症状以前,经历较长的潜伏期,之后缓慢发病,因此被称为慢病毒。

慢病毒基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转录为cDNA,并形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA将整合到细胞基因组中。慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效地将目的基因(或shRNA)导入动物和人的原代细胞或细胞系。整合后的DNA转录为mRNA,回到胞浆中,进而表达目的蛋白或产生RNAi效应。


virus-6.png



virus-7.png

慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等,又很少引发机体免疫反应,能达到良好的基因治疗效果,具有广阔的应用前景,现已成为国际上最通用的转染系统之一,广泛应用于各类实验室。

virus-8.png

慢病毒技术应用

1.     将目的基因/shRNA转入难以转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞;

2.     将目的基因/shRNA转入动物组织,以期获得长期表达;

3.     构建稳定表达目的蛋白/shRNA的细胞系,再用ex vivo的方法导入动物体内;

4.     基因治疗、转基因动物、基因敲除;

5.     药物研究:构建表达受体蛋白的细胞系,研究药物作用;

6.     快速建立生产目的蛋白的细胞系,非常有前途的真核细胞表达方法。


昵称:
内容:
验证码:
提交评论