慢病毒技术简介

慢病毒属（lentivirus）在分类上属于逆转录病毒科，为二倍体RNA病毒。原发感染的细胞以淋巴和巨噬细胞为主，导致感染个体发病。慢病毒感染的主要临床特点是在出现典型的临床症状以前，经历较长的潜伏期，之后缓慢发病，因此被称为慢病毒。


慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效地将目的基因（或shRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转录为DNA，并形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA将整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录为mRNA，回到胞浆中，进而表达目的蛋白或产生RNAi效应。


慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等，又很少引发机体免疫反应，能达到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景，现已成为国际上最通用的转染系统之一，广泛应用于各类实验室。


慢病毒技术应用


1.  将目的基因/shRNA转入难以转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞；

2.  将目的基因/shRNA转入动物组织，以期获得长期表达；

3.  构建稳定表达目的蛋白/shRNA的细胞系，再用ex vivo的方法导入动物体内；

4.  基因治疗、转基因动物、基因敲除；

5.  药物研究：构建表达受体蛋白的细胞系，研究药物作用；

6.  快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核细胞表达方法。